抗体下游纯化策略需根据抗体类型及其结构特性进行优化。以下是常见抗体类型的纯化策略及关键技术点：

1.单克隆抗体（mAb）

• Protein A/G亲和层析：高效捕获，结合Fc区，去除大部分宿主蛋白（HCP）和核酸。
• 注意：不同IgG亚型对Protein A结合力不同（如IgG3较弱），可能需要调整洗脱pH或改用Protein G。
• 低pH病毒灭活：亲和层析后立即进行，灭活潜在病毒。
• 离子交换层析（IEC）：
• 阳离子交换（CEX）：结合模式下进一步去除聚集体和电荷变体。
• 阴离子交换（AEX）：流穿模式下去除DNA、HCP和内毒素。
• 分子排阻层析（SEC）：精纯步骤，去除聚集体，确保单体纯度。
• 切向流过滤（TFF）：浓缩和缓冲液置换，为后续制剂准备。

2.抗体片段（Fab、scFv、单域抗体等）

• 亲和标签层析：如His标签（金属螯合层析）、Flag标签或抗原亲和层析。
• 离子交换层析：
• 利用片段表面电荷差异，优化pH和盐浓度实现分离（如Fab片段pI通常低于完整抗体）。
• 疏水相互作用层析（HIC）：针对疏水性差异纯化，尤其在去除错误折叠片段时有效。
• 复合模式层析（MMC）：如Capto adhere，结合多种作用力提高分辨率。
• SEC或TFF：去除聚集体及缓冲液置换。

3.双特异性抗体（BsAb）

• 亲和层析组合：若含Fc区仍可用Protein A，但需结合其他方法分离正确配对双抗。
• Capto L亲和层析：特异性结合κ轻链，用于分离含不同轻链的双抗。
• 离子交换层析：利用电荷差异分离异源二聚体与同源二聚体。
• pH梯度洗脱：优化CEX洗脱条件以提高分辨率。
• SEC或AEX：去除聚集体和残留错配产物。

4.抗体药物偶联物（ADC）

• 疏水层析（HIC）：分离不同药物抗体比（DAR）的ADC，如苯基琼脂糖填料。
• 反相层析（RP-HPLC）：分析和小规模制备，去除未偶联药物。
• TFF：缓冲液置换并浓缩，避免有机溶剂影响稳定性。
• 特异性去除步骤：如使用巯基柱捕获未偶联的毒素。

5.多克隆抗体（pAb）

• 混合亲和层析：Protein A/G/L组合，覆盖更多Ig亚型。
• 抗原亲和层析：特异性纯化目标抗体，但成本较高。
• 沉淀法：硫酸铵或辛酸沉淀初步富集IgG。
• AEX流穿模式：去除酸性杂质（如白蛋白）。

6.IgM/IgA等大分子抗体

• 凝胶过滤层析（SEC）：分离单体与多聚体。
• 离子交换层析：高载量填料（如Fractogel）处理大分子。
• 羟基磷灰石层析：利用钙离子结合特性纯化IgM。
• 超速离心或TFF：去除聚集物并浓缩。

通用关键点

• 病毒清除：低pH孵育、纳米过滤（20 nm）、溶剂去污剂法。
• 去内毒素：AEX流穿模式或专用吸附剂（如EndoTrap）。
• 工艺强化：连续层析技术（如CaptureSMB）提高效率。
• 分析支持：HPLC（SEC、IEX）、CE-SDS、质谱监控关键质量属性（CQA）。